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抗体检测通用ELISA操作流程(效价测定)

593 人阅读发布时间:2025-07-25 15:41

新闻图片1

抗体检测通用ELISA操作流程(效价测定)

1.包被步骤:

1)用包被缓冲液配制1-10 μg/ml抗原溶液(现配现用)

2)向高结合力ELISA板(货号80112)每孔加入100μl抗原溶液,覆以封板膜,室温轻摇孵育2-6小时或4℃过夜

3)吸弃溶液,用洗涤缓冲液洗板2

2.封闭步骤:

1)用封闭缓冲液母液配制工作液,每孔加入300 μl,室温轻摇孵育2-6小时或4℃过夜

2)吸弃封闭液并在吸水纸上拍干,板子可立即使用或密封保存于4℃备用

抗体效价检测:

1)用抗体稀释液对免疫前/免疫后血清进行梯度稀释(1:1001:100,000),每孔加入100ul。覆以封板膜,室温轻摇孵育30分钟。

2)吸弃液体,用洗涤缓冲液洗板5次(每次200-300 μl,洗涤不充分会导致高背景)

3)用抗体稀释液配制HRP标记抗兔二抗(1:5,000-1:20,000),每孔加入100μl(稀释不当会导致显色过弱或背景过高)

4)覆以封板膜,室温轻摇孵育30分钟

5)吸弃液体,洗板5次后拍干

6)每孔加入100 μl现成TMB底物溶液

7)覆以封板膜,室温轻摇孵育至阳性孔出现蓝色(最长15分钟)

8)每孔加入100 μl终止液,蓝色转为黄色

9450 nm波长下读取吸光度

注:所有试剂需使用新枪头及加液槽添加。除特异性抗原/抗体外,ELISA所需全部试剂均可通过试剂盒获取。

注意事项

1)本ELISA流程适用于针对纯化抗原(蛋白质或多肽)产生的抗体的定性检测,不适用于血清或其他体液中抗体浓度的定量测定。

2)本流程默认一抗来自兔源,若使用其他宿主动物需选用相应二抗。

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货号

产品名称

英文名称

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