实验方案丨CIA、CAIA、AIA三种关节炎模型对比（上篇）

一、三模型对比表

二、造模方案实验操作

l CIA胶原诱导关节炎

1、实验试剂

2、实验操作

Ø 乳剂配制

①胶原预处理

冻干型胶原溶于0.05M浓度的醋酸中，终浓度2-4mg/ml；液体型胶原本身是醋酸水溶液，用前需置于冰上低温解冻。

注意：短期储存温度不可超过4℃，高温使蛋白变性，造模直接失败。

②乳化：冰浴条件下，用电动搅拌器先低速混合等体积的CFA+胶原溶液；再高速混匀2min，冷却5min，重复几次直到产生稳定乳液。

③ 乳化判定：滴一滴混合液至冰水里，液滴不扩散=乳化合格。

Ø 加强免疫（标准方案）

Day0 初次免疫: 鼠尾根部皮下注射0.1ml乳剂（每只小鼠0.1mg胶原）；

Day21 加强免疫（核心步骤）

等体积胶原溶液+ IFA按上述操作乳化；尾部皮下注射0.1 ml乳剂，避开初次免疫部位。

注意：加强针严禁继续使用CFA！额外结核抗原会造成全身性炎症，干扰关节病变结果。

Day28-35发病高峰期窗口: 小鼠陆续集中出现关节红肿；Day 42～49持续观测周期: 根据实验设计开展给药、取样、关节评分。

Ø 单次免疫

Day0一次性免疫，无Day21加强针

Day28～35发病窗口

局限：发病分散、发病率下降、个体差异大，不推荐用于药效学研究。

Ø LPS加强免疫

Day0 初次免疫：鼠尾根部皮下注射0.1ml乳剂

Day25～28 LPS加强免疫：腹腔注射LPS 25-50μg，溶解在生理盐水中；关节炎将在24-48小时发生，发病率90-100%。

3、 注意事项

a. 室温放置、反复冻融→胶原失活,发病率暴跌

b. 乳化不充分→抗原游离，免疫效果差

c. 加强针误用CFA→背景炎症过高，实验结果不可信

d. 小鼠品系错误→C57BL/6自然发病率极低，必须加强免疫,但仍难以达到DBA/1效果

4、CIA方案选择

因篇幅问题，CAIA、AIA模型相关请看下篇。更多炎症造模试剂，请咨询博蕾德，Chondrex总代理，国内现货供应！