实验方案丨CIA、CAIA、AIA三种关节炎模型对比（下篇）

二、造模方案实验操作

l CAIA胶原抗体诱导关节炎

1、实验试剂

2、实验操作

Ø 抗体+LPS联合诱导（标准方案）

Day0抗体注射

①试剂于冰上静置复温，轻柔混匀抗体（禁止剧烈震荡）

②给药途径：推荐尾静脉注射，CAIA易感品系也可腹腔注射 

   - 易感品系（DBA/1、Balb/c）：1.5mg/只抗体合剂；  - 钝感品系（C57BL/6）：5.0 mg/只抗体合剂

③对照组：注射同等体积无菌PBS / 同亚型无关对照抗体

Day3 LPS激发

①注射9028 LPS，25～50μg /只

②对照组同步注射等体积PBS

Day6～7小鼠陆续出现足爪红肿

Day10～13到达炎症峰值

Day15～19炎症自然逐步消退

Ø 无LPS高剂量抗体诱导

Day0 易感小鼠单次6～10 mg抗体；或Day0 注射5mg抗体，Day1追加5mg抗体。

关节炎在末次注射后24～48 h发病

局限：抗体消耗量大，实验成本高，常规药效筛选不推荐。极少使用，仅适合不希望引入LPS干扰通路的机制研究。

3、注意事项

a. 仅注射抗体、不注射LPS→易感小鼠发病率大幅降低，C57BL/6几乎不发病

b. LPS剂量过高→小鼠全身性内毒素休克、批量死亡

c. LPS剂量低于25μg→炎症强度不足

d. 反复冻融抗体→抗体蛋白聚集、活性丢失，造模失败

e. 选用普通LPS替代#9028→菌株、纯度未标准化，批次差异大，实验重复性差

l AIA佐剂诱导关节炎

1、实验试剂

2、实验操作：单次免疫

Ø 尾根部皮下注射（推荐）

Day0 注射并观察四足爪病变

①固定大鼠，尾根部碘伏消毒，皮下缓慢推注7027 0.1 mL/只或7024 0.05 mL/只；

②每注射一只，完全弗氏佐剂都需充分颠倒重悬；

②对照组：大鼠尾根部皮下注射等体积无菌石蜡油或者生理盐水。

Day12～14 出现继发性关节炎

Day25 炎症缓慢消退

3、注意事项

a. 佐剂未充分混匀直接注射→大鼠个体发病时间、炎症强度差异大，数据离散

b. 混淆局部肿胀与关节炎→注射后第3～5天足垫红肿属于局部急性炎症，不作为AIA关节炎判定标准，须等待继发性炎症

c. 使用IFA佐剂造模→几乎无法诱导全身性多发关节炎

d. 新进大鼠直接造模→动物应激过大，大幅降低发病率

三、关节炎评估

四、模型选择建议

Ø 如果首要目标是：速度快、成功率高、不挑小鼠品系

推荐：CAIA模型； 适合场景：需要快速获得实验数据，或使用C57BL/6等CIA造模困难的小鼠品系。

Ø 如果研究重点是：模拟人类类风湿关节炎的完整病理过程

推荐：CIA模型； 适合场景：研究自身免疫启动机制、T/B细胞功能、以及药物对慢性骨侵蚀的长期影响。

Ø 如果实验体系要求：使用大鼠进行抗炎药物筛选

推荐：AIA模型； 适合场景：在大鼠模型上进行大规模抗炎药物的初步筛选和评价。

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